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Die Tunica muscularis der Urethra hängt mit der Muskulatur des Harnblasenhalses zusammen und die zirkulären Anteile der Urethramuskulatur haben Sphinkterfunktion. Harnblasennah findet man glatte Muskulatur und am distalen Anteil findet sich Skelettmuskulatur, welche eine Abspaltung des Diaphragma urogenitale darstellt. Die äußerste Schicht besteht wiederum aus lockerem Bindegewebe, welches das Organ einbettet und zahlreiche Anschnitte von Nerven, Fettgewebe und Blutgefäßen enthält.